徠卡倒置顯微鏡由于高分辨掃描電鏡的間世，為用表面標(biāo)記技術(shù)觀察細(xì)胞表面形態(tài)和區(qū)別兩類紉胞群與其表面形態(tài)相的機(jī)能提供了條件。用此技術(shù)方法可研究細(xì)胞表面抗原、受體的性質(zhì)，分布及運(yùn)動。

　　但由于倒置顯微鏡掃描電鏡與透射電鏡的成像原理不同，因此對免疫掃描電境術(shù)的標(biāo)記物有些特殊要求。具體都有哪些要求呢?我們總結(jié)幾點(diǎn)如下：

　　1.清晰、容易識別的形狀。對透射電鏡的標(biāo)記物要求電子致密度高，掃描電鏡的標(biāo)記物電子密度不是重要問題，而形狀是識別的重要因素。

　　2.化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，在標(biāo)本處理過程中不會被損壞品制備過程中能牢固地結(jié)合。

　　3.對細(xì)胞表面的固有親合力差。

　　4.大小適宜：一般而言掃描電鏡分辨率低于透射電鏡，此外掃描電鏡標(biāo)本要金屑鍍膜，這都影響樣品表面結(jié)構(gòu)的分辨。因此標(biāo)記物若太小、結(jié)構(gòu)過于微細(xì)，就不能與樣品表面固有結(jié)構(gòu)區(qū)別，但標(biāo)記物過于大，又不能明確定出去面抗原位置，因此標(biāo)記物大小要兼顧以上兩方面。

　　5.如果樣品以苯乙烯樹脂做為包埋劑，徠卡倒置顯微鏡再行割斷法做掃描電鏡觀察是十分方便的。因?yàn)楸揭蚁┚酆虾?，氧化丙烯及醋酸異戊酌等很容易將其溶解，多次更換溶劑便可將苯乙烯清除干凈。因此，在制做透射電鏡標(biāo)本時，多做出幾個包埋膠囊樣品，待聚合后，按上述方法割斷，將割斷好的樣品放在氧化丙烯中，約2小時后便可經(jīng)酷酸異戊酷置換、臨界點(diǎn)干燥。

　　如果徠卡倒置顯微鏡應(yīng)用高分辨率掃描電鏡，雖然效果不錯，但因?yàn)閷?biāo)記物的特殊要求，它也有一定的局限性。